Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选

• 作者: 孙远明 张宏斌 杨金易 武婕 潘科 王弘 肖治理 郑霖 雷红涛
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Lipocalin文库 克百威 Anticalin分子
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 528-532
• 页数: 5页
• 分类号: Q514
• 字数: 3652字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0251-0790.2008.03.019

摘要

构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7 anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.