转化生长因子β 1基因克隆及重组真核表达质粒的构建

• 作者: 殷力 王义生 王刚
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子β1 克隆 质粒载体
• 年，卷（期）: 2008,（42）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8255-8258
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3833字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.42.012

摘要

背景:通过基因转移方法研究某一外源性基因存细胞中的作用是目前分子生物学常用的技术手段,与病毒载体相比,应用pcDNA4.0-TGF.B 1真核表达质粒的转染方法无遗传毒性和细胞毒性,有更高的安全性.目的:通过克隆转化生长因子γβ1基因,观察构建重组转化生长因子β1l基因真核表达质粒的可行性.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的体外实验,于2007-03/2008-02在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成.材料:2月龄清洁级健康SD大鼠,雌雄不拘,用于分离细胞中RNA.方法:从大鼠骨髓细胞中分离提取转化生长因子β 1的mRNA,反转录-聚合酶链反应扩增后,克隆入pGEM-T载体,PCR鉴定重组子;酶切下目的基因转化生长因子β1,再亚克隆入载体pcDNA4.0质粒,酶切鉴定亚克隆重组子并进行DNA序列分析.主要观察指标:TGF-β1cDNA、pGEM-T-TGF-β1和重组子pcDNA4.0-TGF-β1的表达.结果:经过反转录-聚合酶链反应扩增得到TGF-β1 cDNA条带;PCR扩增鉴定得到pGEM-T-TGF-β1.酶切鉴定得到亚克隆重组子pcDNA4.0-TGF-β1,经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致.结论:成功克隆大鼠转化生长因子β1基因,并构建出重组转化生长因子β1真核表达载体.