pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞的体外表达及体内成骨能力

• 作者: 刘丹平 蒲勤 魏利成
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 pcDNA3-hBMP2 成骨能力 表达
• 年，卷（期）: 2008,（38）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7587-7590
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.38.027

摘要

背景:能否通过病毒或者非病毒载体将骨形态发生蛋白2转导到骨髓基质细胞发挥成骨作用?目的:观察真核表达载体pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞后体外表达,同时将MSC转染后但未筛选兔骨髓基质细胞自体回植入肌组织,利用X线观察其成骨情况.设计、时间及地点:观察对比实验.实验于2004-11/2005-04在辽宁医学院骨科研究室完成.材料:6只成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量2.0～3.0 kg.BMP2抗体为美国Sanaka公司产品,pcDNA3-hBMP2由解放军第四军医大学生化教研室蒲勤教授提供,限制性内切酶购于大连宝生物工程有限公司.方法:从大肠杆菌提取超纯质粒pcDNA3-hBMP2,从成年兔股骨抽取骨髓,密度梯度分离法分离培养骨髓基质干细胞,将细胞分成4组:A组:pcDNA3-hBMP2转染进行G418筛选;B组:pcDNA3-hBMP2转染未用G418筛选;C组:给予pcDNA3空载体转染;D组:仅加入脂质体转染试剂Fugene 6.主要观察指标:①应用免疫组织化学法检测转染后瞬时表达.②应用免疫组织化学法检测细胞骨钙素表达,分别应用原位杂交法检测细胞Ⅰ型胶原表达.③转染2周后将B组细胞自体回植入兔后腿肌组织中,移植4周后应用X射线观察成骨情况. 结果:①pcDNA3-hBMP2成功转染入骨髓基质干细胞内并100%瞬间表达BMP2.②基因转染4周后,A组细胞骨钙素及Ⅰ型胶原表达高于C组及D组.③B组细胞回植肌组织4周后,X射线可显示新骨形成.结论:pcDNA3-hBMP2能安全有效转染兔骨髓基质干细胞,通过其分泌物BMP2来作用诱导细胞加速分化为成骨细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘丹平	辽宁医学院附属第一医院骨科	61	259	9.0	13.0
2	魏利成	邵阳市第一人民医院骨科	5	21	3.0	4.0