pcDNA3.1-血管内皮生长因子165质粒局部注射对大鼠软组织缺损修复的影响

• 作者: 刘军莉 杨加峰 武士清 王海斌 许复郁 赵冬梅 邱丽萍
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因转染 血管内皮细胞生长因子 胶原 免疫组织化学
• 年，卷（期）: 2008,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3901-3904
• 页数: 4页
• 分类号: R392.114
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.20.023

摘要

背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多.目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响.设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验.材料:健康SD大鼠30只.方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4 DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理.主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达.结果:30只均进入结果分析.①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功.②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05).③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低.对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟.结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合.