体外诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞的可行性

• 作者: 刘德伍 易敬林 杨海军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 角膜上皮细胞 表皮生长因子 诱导分化
• 年，卷（期）: 2008,（38）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7491-7494
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5476字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.38.019

摘要

背景:目前同种异体角膜移植是角膜病的主要治疗手段,但该法存在免疫排斥反应、供体来源短缺、角膜内皮细胞慢性丧失功能等难以克服的缺点.目的:探讨人骨髓间充质干细胞在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2004-06/2005-06在江西省人民医院中心实验室江西省干细胞重点实验室完成.材料:成人角膜缘上皮组织由江西省眼库提供,由志愿者捐献.经肝素抗凝的成人骨髓7份,来自江西省人民医院骨髓穿刺室同期收治的需要行骨髓细胞学检查的患者,均排除血液系统恶性疾病.方法:无菌条件下将人角膜缘上皮组织剪碎,胰蛋白酶消化,过滤离心,加入含20% FBS的DMEM/F12培养液,制作条件培养基,置于-20 ℃备用.采用淋巴细胞分离液密度梯度法从人骨髓液中分离出单个核细胞层,贴壁法培养扩增,取传至第5代的骨髓间充质干细胞,按2×104个/孔密度接种,待细胞完全贴壁后吸除培养液,设立5组:第1组为空白对照,仅加入含10%FBS的DMEM/F12培养基继续培养;其余4组在空白对照的基础上分别加入5,10,15 μg/L表皮生长因子、10μg/L表皮生长因子+50%条件培养基,每3 d换液1次,培养30 d.主要观察指标:通过细胞角蛋白抗体AE1、AE5免疫组织化学染色结果检测细胞横向诱导转化率.结果:AE1免疫组化染色后与空白对照组比较,5,10,15 μg/L表皮生长因子组、10 μg/L表皮生长因子+50%条件培养基组的细胞显色率均明显升高(F=415.39,P < 0.01);各诱导组间两两比较差异均有显著性意义(F=373.96,q=38.65,18.16,20.49,P < 0.01);10 μg/L表皮生长因子组与10 μg/L表皮生长因子+50%条件培养基组细胞显色率基本相似(t=0.12,P > 0.05).AE5免疫组化染色后,各组细胞的胞浆都能被DAB均匀淡染.结论:5～15 μg/L表皮生长因子能诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞,且此浓度范围内的表皮生长因子诱导作用逐渐增强.用成人角膜缘干细胞培养液制成的50%条件培养基对诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞无明显促进作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘德伍	南昌大学第一附属医院烧伤中心	90	487	12.0	14.0