摘要:
背景:研究证明神经干细胞在体外能自然分泌一定量的神经生长因子,因此若将神经干细胞移植入内耳,可作为神经生长因子源源不断的供体.目的:比较神经干细胞内耳移植和神经生长因子肌肉注射两种方式对豚鼠损伤内耳的保护效果.设计:随机对照动物实验.材料:新生24 h豚鼠5只.用于脑海马神经干细胞的制备.方法:①动物实验:健康豚鼠40只,随机分为6组:正常对照组4只,不施加任何处理因素;单纯耳蜗打孔组8只,仅施以耳蜗底转骨壁打孔术;单纯神经干细胞移植组8只,经耳蜗底转骨壁打孔后,向内耳注入Brdu标记的神经干细胞;致聋模型组4只,按4 mg/kg体质量连续3 d腹腔注射顺铂建立耳聋模型;致聋后神经干细胞移植组8只,先造成耳聋模型,而后经耳蜗底转骨壁打孔向内耳注入Brdu标记的神经干细胞:致聋后神经生长因子移植组8只,先造成耳聋模型.然后肌肉注射神经生长因子.移植后14,28 d测定纯音听阈值,各处死4只用于耳蜗基底膜四唑氮蓝铺片、苏木精一伊红染色、Brdu免疫组化染色、神经生长因子免疫组化染色.②RT-PCR检测实验:健康豚鼠30只,随机分为4组:正常对照组8只、致聋模型组8只、致聋后神经干细胞移植组5只、致聋后神经生长因子移植组9只,干预措施同上.移植后28 d RT-PCR检测各组动物耳蜗组织神经生长因子rnRNA的表达.结果:与正常对照组比较,移植后14,28 d致聋模型组、致聋后神经干细胞移植组、致聋后神经生长因子移植组的纯音听阈值均显著升高(P<0.05),但后2组升高幅度明显低于致聋模型组(P<0.05),且毛细胞排列整齐,无缺失、核溶解、碎裂等现象,螺旋神经节细胞的结构及形态基本接近正常对照组.移植后7 d,耳蜗底转的移植位点、鼓阶蜗轴侧周围及基底膜下方均町见大量BrdU阳性细胞,血管纹、鼓唇和蜗神经纤维神经生长因子免疫组化染色均呈阳性表达,28 d时致聋后神经干细胞移植组染色程度强于致聋后神经生长因子移植组.RT-PCR检测耳蜗神经生长凶子mRNA的表达与免疫组化染色结果基本一致.结论:内耳移植神经干细胞和肌肉注射神经生长因子对豚鼠损伤内耳的毛细胞、螺旋神经节以及听力保护作用基本相似,但免疫组化及RT-PCR结果表明前者耳蜗内分布的神经生长因子较后者更为密集.