绿色荧光蛋白基因腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

• 作者: 周德祥 唐艳萍 姚鹏飞 姜晓丹 徐如祥 秦昆 秦玲莎 蔡颖谦 许刚 邹雨汐
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 绿色荧光蛋白 腺病毒载体 细胞分化
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 188-190
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2008.02.010

摘要

目的 研究腺病毒栽体绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)转梁和表达的量效关系及对细胞生物学特性的影响,探讨用该载体构建基因修饰BMSCs的可行性.方法 在体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞免疫表型;293 细胞包装制备病毒,以不同滴度的Ad-GFP(1×103～1×1010PFU/ml)转染BMSCs;细胞计数法分析转染率,倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK -8法检测细胞增殖活性;用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导转染Ad-GFP的BMSCs向神经样细胞定向分化.结果 3～6代BMSCs表面标志CD34、CD45阴性而CD29、CD44阳性,当病毒滴度为1×107 PFU/ml时转染率为55%.为1×109及1×1010Pfu/ml转染率均为85%,但1×1010PFU/ml时出现细胞病理现象,7 d荧光表达最强,28 d仍可见荧光表达,转染Ad-GFP的BMSCs经β-巯基乙醇诱导可分化为神经元样细胞,神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性.结论 合适滴度的Ad-GFP可以高效转染BMSCs,对细胞的生物学特性影响较小,不影响诱导分化功能.BMSCs可以作为Ad-GFP载体系统进行基因治疗的种子细胞.