重组转化生长因子β3基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响

• 作者: 余姣 周霞 徐可树 李琪 钱伟
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子β 肝硬化 胶原合成
• 年，卷（期）: 2008,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1273-1278
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0376-2491.2008.18.010

摘要

目的 观察重组转化生长因子β3(TGF-β3)基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响.方法 (1)构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1.(2)将pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染大鼠肝星状细胞(HSC)-T6,经G418筛选建立稳定高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆.(3)pcDNA3.1(+)-TGF-B3转染HSC-T6阳性细胞克隆,荧光实时定量PCR法检测TGF-β3mRNA的表达;荧光实时定量PCR法及Western印迹法分别检测TGF-β3、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达情况.结果 (1)pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β3质粒均可转染HSC-T6细胞,以转染48 h时转染效率最高,达28.2%.(2)pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6细胞阳性克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1mRNA表达无明显改变,而蛋白表达明显低(0.48±0.07 vs 0.66±0.14,P=0.023);Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达明显低(mRNA:7.2±1.0 vs 13.7±0.4,P=0.010,蛋白:0.45±0.21 vs 0.82±0.13,P=0.041),MMP-2 mRNA及蛋白较低,但差异无统计学意义(均P>0.05),MMP-9 mRNA及蛋白表达明显多(均P<0.05),TIMP-1 mRNA及蛋白表达明显低(均P<0.05).结论 (1)重组TGF-β3真核表达载体构建正确,在转染阳性克隆细胞48 h后获得高效表达;(2)稳定高表达TGF-B1的HSC-T6细胞阳性克隆可作为肝纤维化细胞模型;(3)pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染阳性克隆能减少胶原合成,并通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达对胶原沉积起抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐可树	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	59	235	9.0	13.0
2	钱伟	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	120	672	13.0	18.0
3	余姣	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	9	52	4.0	6.0
4	李琪	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	20	50	4.0	6.0
5	周霞	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	17	63	4.0	7.0