复制型HBV重组腺病毒的制备

• 作者: 周陶友 唐红 尹华 李红 王月宾 韩红霞
• 来源期刊: 四川医学
• 学科: 生物学
• 关键词: AdEasy系统 腺病毒 乙肝病毒 同源重组 细菌
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基金论文
• 页码范围: 500-503
• 页数: 4页
• 分类号: Q789
• 字数: 3142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0501.2008.05.003

摘要

目的 通过细茼体内同源重组方法,构建含1.3拷贝HBV DNA片段(HBV4.1)的HBV复制型重组腺病毒.方法 从质粒pTh-HBV4.1上获取HBV4.1片段,插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建含HBV4.1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1.然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy-1进行同源重组,形成重组腺病毒质粒pAd-GFP/HBV4.1,经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增,获得腺病毒Ad-CFP/HBV4.1.通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达,检测腺病毒滴度和感染效率;采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在.结果 经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1和重组腺病毒基因组质粒pad-GFP/HBV4.1构建成功;GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1已成功包装;PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBV DNA片段.在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达(4.2～4.8)×107 efu/ml;当MOI为100时,感染HEK293细胞的效率>90%.结论 成功构建了携带1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1,为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究英定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐红	四川大学华西医院感染性疾病中心	403	1554	17.0	23.0
2	周陶友	四川大学华西医院感染性疾病中心	31	254	7.0	15.0
3	李红	四川大学华西医院感染性疾病中心	95	861	17.0	26.0
4	王月宾	四川大学华西医院感染性疾病中心	4	7	2.0	2.0
5	尹华	四川大学华西医院感染性疾病中心	1	2	1.0	1.0
6	韩红霞	四川大学华西医院感染性疾病中心	2	3	1.0	1.0