人脐带血间充质干细胞分离培养及向软骨细胞的分化

• 作者: 唐毓金 罗小琼 解继胜 陈维平 黄海玲
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脐血 间充质干细胞 软骨细胞 细胞分化 胰岛素样生长因子1
• 年，卷（期）: 2008,（16）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3065-3068
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5207字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.16.016

摘要

目的:关节软骨创伤难以自行修复,传统疗法因修复的组织以纤维软骨为主,缺少正常透明软骨的力学性能及耐用性.种子细胞是组织工程化软骨形成的首要条件,为此拟建立一套较为简便、有效和实用的脐血间充质干细胞体外分离培养体系,探讨其向软骨细胞分化的可行性.方法:实验于2005-07/2006-09在右江民族医学院组织学与胚胎学教研室完成.①细胞来源:无妊娠并发症足月分娩后的胎盘脐静脉血,均征得供者同意,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:穿刺抽取15 mL脐带血,密度梯度法分离吸取分层界面的白色环形絮状物,其中富含单个核细胞,离心后沉积细胞用含15%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素的DMEM高糖培养基悬浮,调整细胞密度为1×109 L-1接种于25 T培养瓶内,放置在37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,72 h后更换培养基,去除红细胞及其他未贴壁细胞,至70%～80%融合时传代.③实验评估:取传至第2代的脐带血间充质干细胞进行增殖能力检测;加入含终浓度为100 μg/L胰岛素样生长因子1,15%胎牛血清的DMEM软骨细胞诱导培养基,倒置显微镜下连续观察细胞生长情况,并行苏木精-伊红染色,应用扫描电子显微镜对诱导后细胞进行鉴定.结果:①细胞形态学观察:来源于脐血的单个核细胞接种24 h少量贴壁,近似圆形或短梭形;体外培养3 d后可见分散的间充质干细胞小集落,集落细胞为长梭形,呈放射状生长;2周后细胞集落彼此融合,呈旋涡状或菊花状生长.传代后3周细胞基本融合成层.②细胞增殖能力检测:脐带血间充质干细胞传代后8～12 h贴壁,7～13 d细胞处于对数生长期,16～19 d进入平台期,扩增速度快于原代培养,倍增时间为8.5 d.③脐带血间充质干细胞向软骨细胞诱导分化结果:胰岛素样生长因子1诱导12 d,脐带血间充质干细胞苏木精-伊红染色可见分泌少量细胞外基质.扫描电子显微镜下呈现软骨细胞特点,多边形,外围被分泌细胞外基质所围绕,呈蜘蛛网样.结论:从人脐带血中成功分离获取间充质干细胞,在体外经胰岛素样生长因子1条件培养液诱导短期内可获得软骨细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐毓金		122	318	9.0	12.0
2	黄海玲	右江民族医学院组织学与胚胎学教研室	78	324	9.0	11.0
3	陈维平	广西医科大学组织学与胚胎学教研室	67	301	10.0	13.0
4	罗小琼		26	129	7.0	10.0
5	解继胜	右江民族医学院组织学与胚胎学教研室	87	351	9.0	12.0