细胞周期素D1shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

• 作者: 栗娜 胡义德 黄虎
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞周期素D1 小KNA干扰 A549细胞
• 年，卷（期）: 2008,（20）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2947-2950,2954
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3600字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建针对细胞周期素D1(cyclinD1,由CCND1基因编码)的shRNA表达载体,筛选出有效序列,观察其对肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 设计针对cyclin D1基因编码区的3条寡核苷酸链,体外退火后克隆入干扰栽体Pgenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.以脂质体法将空载体Pgenesil-1-K和3个重组质粒Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13分别导人549肺腺癌细胞,48 h后用Real time PCK和Western blotting技术检测各实验组肺腺癌细胞内cycli D1 mRNA及蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期观察构建的载体对A549细胞增殖的影响.结果 经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的 基因片断.转染cyclin D1-shRNA的A549细胞48 h后测定cyclin D1 mRNA和蛋白含量.以Pgenesil-1-CCND13抑制cyclin D1 mRNA及蛋白表达效果最为有效.其抑制率分别为62%和60%,而且它能抑制A549细胞的增殖.结论 成功构建了针对cyclin D1的RNA干扰表达载体Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13,Pgenesil-1-CCND13能有效抑制cyclin D1在A549细胞中的表达,并抑制A549的增殖,为进一步应用于肺腺癌的治疗实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡义德	第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤研究所	87	589	13.0	19.0
2	黄虎	第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤研究所	3	8	2.0	2.0
3	栗娜	解放军第161医院病理科	9	87	4.0	9.0