人β-干扰素核基质附着区在CHO细胞中对转基因表达的调控

• 作者: 张俊河 昝玉玺 王俐 王天云
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 核基质结合区 转基因 基因沉默 报告基因
• 年，卷（期）: 2008,（29）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5623-5626
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5384字
• 语种: 中文

摘要

背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达.目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响.设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成.材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供.含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建.方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用Sac I/Kpn I及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化E.coliJM109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区.分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因.主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达.PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上.结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株.β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.065 0,PCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131.②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437 bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上.结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王天云	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	76	498	10.0	20.0
2	张俊河	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	31	147	6.0	11.0
3	昝玉玺	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	23	148	7.0	11.0
4	王俐	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	22	118	7.0	9.0