血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定

• 作者: 刘军 宋建星 韩焱福
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮细胞生长因子 腺病毒 粘粒 同源重组 基因治疗 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（24）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 4651-4654
• 页数: 4页
• 分类号: R329.114
• 字数: 4961字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.24.010

摘要

目的:基因重组腺病毒具有较高的转染率,且宿主范围广.实验拟构建携带人血管内皮细胞生长因子165基因的重组腺病毒载体(Ad.VEGF165),为后续基因转染、微囊化基因工程细胞及其动物模型研究提供实验基础.方法:实验于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所实验室完成(国家级重点实验室).①实验材料:pAxCAwt.VEGF165由长海医院胸心外科研究所惠赠.②实验方法:采用脂质体转染法,将pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC共转染人胚肾293细胞,扩增后获得载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷犁重组腺病毒.⑧实验评估:应用聚合酶链反应及酶切证实重组腺病毒中的目的基因.并根据50%组织培养感染剂量法计算病毒滴度.结果:①重组腺病毒Ad.VEGF165的构建:采用脂质体法可使pAxCAwt.VEGF165与DNA-TIC有效转染人胚肾293细胞,扩增出载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒.②重组腺病毒Ad.VEGFl65的鉴定:聚合酶链反应的产物进行Nco I酶切鉴定,可得到597 bp、146 bp 2个片段,与GeneTool软件理论上计算的结果完全一致,计算病毒滴度为2.2×1015pfa/L.结论:采用pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC系统经脂质体转染法成功构建的复制缺陷的重组腺病毒Ad.VEGF165滴度高、毒性低、效率高、体外转染安全.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘军	解放军第二军医大学长海医院整形外科	116	483	12.0	17.0
2	宋建星	解放军第二军医大学长海医院整形外科	21	221	6.0	14.0
3	韩焱福	解放军第二军医大学长海医院整形外科	1	10	1.0	1.0