endostatin基因重组腺病毒的构建及在人肺腺癌细胞的表达

• 作者: 宋宝 宋现让 王兴武 郑燕 魏玲
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 腺病毒 内皮抑素 基因治疗
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 710-713,718
• 页数: 5页
• 分类号: R349.83
• 字数: 3570字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.06.010

摘要

目的 利用AdEasy系统构建鼠内皮抑素(ES)基因重组腺病毒Ad.ES,并观察其在人肺腺癌细胞SPCA-1的表达.方法 采用酶切、连接和转化等方法,将质粒pcDNA3.ES中的ES片段插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV.ES,经Pme Ⅰ酶切线性化后与含腺病毒基因骨架的质粒载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内进行同源重组得到腺病毒质粒pAd.ES,重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后,转染人胚肾293细胞包装成腺病毒颗粒Ad.ES,将病毒上清反复感染293细胞获得高滴度病毒,应用氯化铯(CsCl)梯度离心的方法纯化病毒,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白(GFP)标签测定重组腺病毒的功能滴度.用2 MOI重组腺病毒Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h,流式细胞仪检测GFP表达阳性率,ELISA法测定细胞培养上清液中ES的含量.结果 双酶切证实重组腺病毒穿梭载体pAdTrack.CMV.ES质粒构建正确,卡那霉素抗性筛选和Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d,约20%的细胞表达GEP,回收病毒重复感染293细胞,CsCl梯度离心纯化最终获得约5.6×1010TU/mL滴度的重组病毒.Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h后,细胞GFP阳性率为93%,细胞培养上清液中ES的含量较Ad.GFP感染组和阴性对照组明显增加(P＜0.05).结论 应用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和ES的重组腺病毒,Ad.ES体外感染人肺腺癌细胞SPCA-1可显著提高ES表达,为进一步研究抗血管生成治疗肺癌奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王兴武	山东省肿瘤医院基础研究中心	85	423	12.0	15.0
2	宋现让	山东省肿瘤医院基础研究中心	109	609	13.0	17.0
3	魏玲	山东省肿瘤医院基础研究中心	78	422	11.0	15.0
4	宋宝	山东省肿瘤医院基础研究中心	32	185	8.0	11.0
5	郑燕	山东省肿瘤医院基础研究中心	17	58	5.0	6.0