翻白草总DNA的提取与ISSR-PCR体系的建立与优化

• 作者: 伍贤进 刘选明 彭帅 罗玥佶
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 翻白草 总DNA提取 ISSR-PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 895-897,901
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 4074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.03.028

摘要

[目的]针对翻白草ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础.[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系.[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系,确定了25 μl PCR反应体系中各试剂终浓度:1×Buffer缓冲液,1 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.4 μmol/L引物,DNA模板约20～30 ng,退火温度在50～56 ℃;实验表明:Taq 酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg2+浓度、dNTP浓度均对ISSR 反应结果具有较大影响.[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	伍贤进	怀化学院生物工程系	109	796	16.0	20.0
2	刘选明	湖南大学生命科学与技术研究院生物能源与材料研究中心	88	747	16.0	23.0
3	罗玥佶	湖南大学生命科学与技术研究院生物能源与材料研究中心	3	52	3.0	3.0
4	彭帅	湖南大学生命科学与技术研究院生物能源与材料研究中心	3	52	3.0	3.0