分离培养方法及冻存技术对犬骨髓间充质干细胞生长和增殖的影响

• 作者: 何帮剑 童培建 肖鲁伟 赵红昌 金红婷
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 犬 骨髓间充质干细胞 体外培养 生物学特性 冻存
• 年，卷（期）: 2008,（38）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7455-7459
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.38.013

摘要

背景:骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏.目的:建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法. 设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成. 材料:健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取.方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养.将第2代骨髓间充质干细胞与12.5% DMSO混匀置于冻存管中,采用慢冻快融法进行冻存和复苏:将冻存管置于-4 ℃冰箱2 h,然后移入-30 ℃冰箱2 h,再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80 ℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80 ℃冰箱保存.复苏时将冻存管从液氮或- 80 ℃冰箱中取出,立即置37 ℃水浴并轻轻摇动, 1～2 min内迅速解冻.主要观察指标:复苏前后细胞成生长活性及形态变化.结果:分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强,传代细胞贴壁较快.经过液氮长期冻存后, 将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛.结论:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞,应用慢冻快融技术进行冻存和复苏,较好的保持了冻存细胞的活力和功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何帮剑	浙江中医药大学附属第一医院骨科	68	526	12.0	19.0
2	童培建	浙江中医药大学附属第一医院骨科	209	1896	23.0	32.0
3	肖鲁伟	浙江中医药大学附属第一医院骨科	164	1412	20.0	28.0
4	赵红昌	浙江中医药大学附属第一医院骨科	5	33	3.0	5.0
5	金红婷	浙江中医药大学附属第一医院骨科	63	567	15.0	21.0