BMI-1干扰基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定

• 作者: 乔纯 朱伟 许文荣 钱晖
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA BMI-1 腺病毒载体 构建
• 年，卷（期）: 2008,（34）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6701-6704
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.34.034

摘要

背景:BMI-1的表达对于维持干细胞特别是造血干细胞、神经干细胞、肿瘤干细胞的自我更新能力是不可缺少的.目的:以细菌内同源重组法构建携带BMI-1干扰基因的重组腺病毒载体,制备重组腺病毒pShuttle-H1-AdEasy-1-P1P2/P3P4.设计、时间及地点:开放性实验,于2006-02/2007-08在江苏大学医学技术研究所完成.材料:限制性内切酶由NewEngland BioLabs提供,腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,大肠杆菌BJ5183、Ad293细胞由南京师范大学生科院分子医学生物技术江苏省重点实验室惠赠.方法:采用细菌内同源重组法构建RNA干扰腺病毒载体pShuttle-H1,Pme Ⅰ线性化质粒,通过同源重组腺病毒骨架蛋白pAdeasy-1,得到重组的腺病毒干扰质粒:经Pac Ⅰ线性化后片j脂质体转染方法转染293A细胞,收获腺病毒重组病毒子,以未转入小干扰RNA片段的重组质粒为对照,包装后收集细胞,反复裂解细胞获得腺病毒.主要观察指标:腺病毒质粒重组构建及鉴定情况.结果:经酶切鉴定,已成功构建siRNA的重组腺病毒表达载体pShuttle-H1AdEasy-1-P1/P2P3P4,获得了重组病毒子.结论:利用新型腺病毒载体pAdeasy-1系统口J在短期内制备BMI-1干扰基因的腺病毒表达载体,并制备出重组腺病毒PlP2/P3P4.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱伟	江苏大学医学技术学院	121	743	14.0	21.0
2	许文荣	江苏大学医学技术学院	156	795	13.0	20.0
3	钱晖	江苏大学医学技术学院	88	346	9.0	14.0
4	乔纯	江苏省人民医院血液科	10	4	1.0	2.0