内皮抑素重组腺病毒表达载体构建及对内皮细胞增殖的影响

• 作者: 刘旭盛 唐辉 张秀琼 徐永清 李春晓 梁晚益 郑天娥
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 重组 遗传 生长抑素 内皮/细胞学 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9986-9989
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 1215字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.50.034

摘要

背景: 烧创伤后创面愈合多伴有瘢痕增生,内皮细胞在瘢痕增生中具有重要作用,抑制内皮细胞的生长可以在一定程度上减轻瘢痕增生.目的: 构建含有人内皮抑索基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并观察与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.设计、时间及地点: 观察对照实验,于2006-09/2007-05在解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所国家重点实验室完成.材料: pAdTrack-CMV及pAdEasy-1购自美国Stratagene公司:293细胞及大肠杆菌Ecoli.DH5 α由本室保存.方法: 以人胎肝组织mRNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应及聚合酶链反应获得内皮抑素基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经聚合酶链反应鉴定及上清中内皮抑素含量检测后,感染角朊细胞,采用套皿法与内皮细胞共培养.并与未转染的角朊细胞进行对照观察.主要观察指标: pAd/hEnd的同源重组及其鉴定,Ad/hEnd的产生与鉴定,转染293细胞后内皮抑素的表达,Ad/hEnd的纯化与滴度测定,培养液中内皮抑素含量,内皮细胞凋亡百分数及内皮细胞抑制率测定.结果: ①成功获取了Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012PFU/L.②感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌内皮抑素,连续培养3 d后,培养液中内皮抑素含量可达226 μg/L.③与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与细胞抑制率均显著高于对照组(P<0.05).结论: 与内皮细胞共培养时.转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌内皮抑素促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐辉		3	14	2.0	3.0
2	徐永清		12	54	4.0	6.0
3	郑天娥	解放军成都军区昆明总医院眼科	2	4	1.0	2.0
4	李春晓		2	10	1.0	2.0
5	张秀琼		1	0	0.0	0.0
6	刘旭盛	解放军第三军医大学西南医院烧伤科	4	7	2.0	2.0