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摘要:
目的:研究证实脂肪组织提取物中存在脂肪源性干细胞,并表现出向多谱系细胞分化的特点.对来源于人皮下脂肪组织的脂肪干细胞进行体外培养,观察其形态特点、生物学特性及间充质来源细胞表面相关标志的表达.方法:实验于2005-11/2007-02在泸州医学院医学分子生物学实验室完成.①对象:行切疤植皮术的正常体质量患者8例,年龄16~45岁,均无传染性疾病,来源于泸州医学院烧伤整形科,实验前征得患者同意.②实验方法:人脂肪干细胞的分离、培养与传代:无菌条件下取患者新鲜的皮下脂肪,Ⅰ型胶原酶消化+贴壁法获取原代脂肪干细胞,生长至70%融合时传代,观察细胞的形态学变化.当原代细胞的胞质中出现较多透亮液滴后,行油红O染色.将第3代脂肪干细胞冻存,1个月后复苏,观察细胞的生长情况.选择生长状态良好的第3代脂肪干细胞,苏木精-伊红染色观察细胞形态,SABC法检测间充质来源细胞特异性标志波形蛋白的表达,SP法检测间充质干细胞表面相关抗原CD44的表达.取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间.结果:①原代和传代过程中人脂肪干细胞的形态学变化:原代和传代培养的细胞均为长梭形贴壁生长.当原代细胞达到50%融合后,部分细胞由梭形逐渐变为多角形或椭圆形,胞质内出现油红O染色阳性的脂滴.传代细胞中此现象逐渐消失,且经冻存后复苏的活细胞率达80%以上,细胞生长、增殖能力未受影响.②间充质来源细胞表面标志的鉴定:第3代人脂肪干细胞的胞质丰富,HE染色弱嗜碱性,呈淡蓝色;波形蛋白阳性率为(97.1±2.3)%,CD44阳性率为(85.4±3.22)%.③人脂肪干细胞的生长曲线及倍增时间:传代培养的脂肪干细胞生长曲线呈"S"形,群体倍增时间为62.38h.结论:从人皮下脂肪组织分离培养出的脂肪干细胞,在体外扩增和冷冻保存后生物学特性稳定,且具有良好的增殖能力,表达间充质来源细胞表面标志波形蛋白和表面抗原CD44.
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文献信息
篇名 体外分离培养人皮下脂肪干细胞的生物学特性及影响因素
来源期刊 中国组织工程研究与临床康复 学科 医学
关键词 脂肪干细胞 间充质干细胞 脂肪组织 细胞培养
年,卷(期) 2008,(12) 所属期刊栏目 技术与方法
研究方向 页码范围 2309-2312
页数 4页 分类号 R394.2
字数 5331字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.12.024
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 刘广益 泸州医学院组织胚胎学教研室 63 316 12.0 15.0
2 王巧稚 泸州医学院组织胚胎学教研室 28 106 7.0 9.0
3 徐富翠 泸州医学院组织胚胎学教研室 40 188 8.0 11.0
4 程基焱 泸州医学院电子显微镜室 55 227 9.0 12.0
5 赵宏贤 泸州医学院组织胚胎学教研室 37 173 8.0 11.0
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