强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立

• 作者: 崔继福 康建 张效林 闫承慧 韩雅玲
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阻遏蛋白 腺病毒E1A蛋白 小鼠
• 年，卷（期）: 2008,（42）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8281-8285
• 页数: 5页
• 分类号: R541
• 字数: 4715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.42.022

摘要

背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨.目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成.材料:强力霉素调控基因表达系统,3T3细胞系.方法:通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基冈阻遏子(mCREG)cDNA序列:将mCREG cDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中,构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体:分别经G418(新霉素)及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆;反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达.主要观察指标:Western blotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达.结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞兜隆:反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及捅入基冈表达均为阳性;Western blotting检测发现随强力霉素诱导荆量的增加(0,0.01,0.1,1 me/L),NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加.结论:成功建立强力霉索调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雅玲	解放军沈阳军区总医院心内科	26	102	7.0	9.0
2	康建	解放军沈阳军区总医院心内科	7	19	3.0	4.0
3	闫承慧	解放军沈阳军区总医院心内科	14	33	4.0	5.0
4	张效林	解放军沈阳军区总医院心内科	7	18	3.0	4.0
5	崔继福	解放军沈阳军区总医院心内科	1	0	0.0	0.0