脂质体介导基因转染人精子膜蛋白PH20DNA疫苗质粒向小鼠骨骼肌导入

• 作者: 任秀花 曹靖 游言文 赵青赞 郝莉 陈雪梅
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: PH-20 脂质体 基因转染 DNA疫苗质粒 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 2170-2172
• 页数: 3页
• 分类号: R339.2
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.11.045

摘要

目的:精子膜蛋白PH-20分布在精子表面,在受精过程中起重要作用,可作为免疫避孕候选疫苗.采用脂质体介导基因转染法将pcDNA3.1(+)-hPH20DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,检测目的基因hPH-20在体内的表达水平.方法:实验于2006-06/2007-02在郑州大学解剖学实验室完成.①清洁级健康BALB/C小鼠12只,随机数字表法分为重组质粒组、空载体组、生理盐水组,4只,组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.已构建好的pcDNA3.1(+)-hPH20重组质粒由本室保存.②实验方法:质粒提取后,用精胺盐酸去除内毒素,鲎试剂榆测晕阳性代表去除成功.取少量质粒行琼脂糖电泳鉴定纯度,用紫外分光光度计测量质粒DNA的含量.每只小鼠于股四头肌分点注射利多卡因预处理3 d.重组质粒组将脂质体包裹的peDNA3.1(+)-hPH20 DNA缓慢注射于股四头肌内,200μg/只.空载体组单纯将pcDNA3.1(+)缓慢注射到股四头肌内,200 μ g/只.生理盐水组于相同部位缓慢注射等鼍生理盐水.重组质粒组分别于注射后第4,7,11,16天以断颈法各处死1只小鼠,空载体组、生理盐水组小鼠均于注射后第11天同法处死.迅速取股内侧肌肉30mg,研磨成粉末状,RT-PCR法检测目的基因hPH-20 mRNA在体内的表达.结果:①提取质粒琼脂糖凝胶电泳检测结果:提取的质粒成功去除内毒素后,琼脂糖凝胶电泳显示质粒纯度较高,绝大部分处于超螺旋状态,有利于体内转基因的表达.紫外分光光度计测量质粒DNA的含量(A 260/A280)为1.8～2.0.②目的基因hPH-20mRNA体内表达RT-PCR检测:重组质粒组注射后第4天即可检测到1530 bp特异性条带,第7天表达增强,第11天达到高峰,第16天表达下降.空载体组、生理盐水组各时间点均未见特异性条带.结论:脂质体介导基因转染法能够高效将peDNA3.1(+)-hPH20 DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,且hPH-20基因于注射后11 d呈峰值表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任秀花	郑州大学医学院解剖学教研室	85	343	9.0	12.0
2	游言文	河南中医学院解剖组胚学科	47	125	6.0	8.0
3	曹靖	郑州大学医学院解剖学教研室	46	97	5.0	7.0
4	陈雪梅	郑州大学医学院解剖学教研室	48	153	6.0	9.0
5	赵青赞	郑州大学医学院解剖学教研室	27	101	6.0	8.0
6	郝莉	河南中医学院解剖组胚学科	20	63	4.0	6.0