单倍体相合造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立及其评价

• 作者: 吴秉毅 吴远彬 吴顺杰 周健 宋朝阳 郭坤元 陆志刚
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 造血干细胞移植 异基因 慢性移植物抗宿主病
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2326-2330
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6053字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.12.034

摘要

目的:因供受者主要或次要组织相容性抗原存在差异而引起的移植物抗宿丰病是影响异基因造血干细胞移植效果的关键因素,目前国内尚缺乏研究此领域的实验动物模型及其评价体系.本实验拟建立半相合异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并制定半定量评价体系.方法:实验于2007-03/08在南方医科大学实验动物中心完成.①动物:供鼠为近交系Balb/CH-2d小鼠40只,雄性,8～10周龄,体质量18～22 g;受鼠为CB6F1小鼠(Balb/c×C57BL/6 F1H-2d/b)48只,雌性,10～12周龄.体质量18～24 g,随机数字表法分为3×107,6×107,9×107个脾细胞移植组及空白对照组,12只/组.小鼠均由南方医科大学实验动物中心提供,SPF级,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:Balb/CH-2d小鼠颈椎脱臼处死,取脾脏研磨后制成脾单细胞悬液,离心弃上清,加入Tris-NH4Cl裂解红细胞,用RPMI 1640调整细胞浓度为1.2×108 L-1,锥虫蓝染色计数脾细胞拒染率为95.6%.3×107,6×107,9×107个脾细胞移植组分别经尾静脉输入对应数量的MHC半相合脾细胞悬液0.5 mL,空白对照组输入等体积RPMI 1640培养液.③实验评估:脾细胞移植后2,5,8,12周,光镜下计数20个分裂相,检查骨髓细胞中的Y染色体数量,进行嵌合体分析.脾细胞移植18 d后,每3 d观察受体小鼠的临床表现,包括体质量、体形、体位、毛发变化及生存情况,并予以评分.输注脾细胞后100 d观察皮肤、肝脏、回盲端小肠靶器官的病理变化,并进行评分.结果:48只受体小鼠均进入结果分析.①嵌合体榆测:6×107个脾细胞移植组可形成较为稳定的低水平供受者混合嵌合体;9×107个脾细胞移植组起初可形成较高水平的供受者混合嵌合体,随时间的推移水平降低;3×107个脾细胞移植组未能形成稳定的供受者混合嵌合体.②慢性移植物抗宿主病的临床及病理评分:移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30～80 d,临床表现以皮肤改变、体质量减轻、弓背体态为主,病理损害以皮肤、肠道及肝脏明显.与3×107个脾细胞移植组比较,6×107,9×107个脾细胞移植组临床和病理评分均显著升高(P＜0.05).慢性移植物抗宿主病发生率均显著升高(P＜0.01);后2组临床和病理各项指标之间差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:输注6×107和9×107个脾细胞的小鼠成功诱导出半相合异基因造血干细胞移植慢性移植物抗宿丰病,其临床和病理评价体系具有较高的一致性和实用性,为进一步分析慢性移植物抗宿主病的发病机制和评价干预因素的优劣奠定实验学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭坤元	南方医科大学珠江医院血液科	138	688	13.0	16.0
2	周健	南方医科大学珠江医院血液科	42	186	8.0	11.0
3	宋朝阳	南方医科大学珠江医院血液科	48	198	8.0	11.0
4	吴远彬	南方医科大学珠江医院血液科	9	20	3.0	4.0
5	陆志刚	南方医科大学珠江医院血液科	21	76	6.0	8.0
6	吴秉毅	南方医科大学珠江医院血液科	38	179	8.0	11.0
7	吴顺杰	南方医科大学珠江医院血液科	2	10	1.0	2.0