人骨形成蛋白2真核表达载体的构建和体外表达

• 作者: 傅德皓 孙立 张字坤 杨述华 汪雷 田晓滨 胡如印 陆延盛
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形成蛋白2 真核表达载体 基因克隆
• 年，卷（期）: 2008,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9819-9822
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.50.031

摘要

背景: 骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)是已知的所有生长因子中对骨的形成作用最强的生长因子,被认为是最具有前途的骨诱导物质.目的: 构建入骨形成蛋白2真核表达载体并观察其体外表达情况.设计、时间及地点: 自身对照实验,于2005-07/2006-05在华中科技大学同济医学院分子生物中心实验室完成.材料;pcDNA3.1(+)载体由华中科技大学同济医学院左石博士惠赠;成骨肉瘤组织由华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科提供.方法: 从人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法扩增获得人BMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒.分别用RcoRI和NotI双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1真核表达载体,将克隆载体中人骨形成蛋白2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序后,用脂质体体外转染小鼠骨髓基质细胞,反转录-聚合酶链反应检测BMP-2的表达.主要观察指标: ①人骨肉瘤细胞总RNA反转录-聚合酶链反应结果.②重组质粒pGEM-T-hBMP-2.和PcDNA3.1-hBMP-2的构建和酶切鉴定.③BMP-2在小鼠骨髓基质细胞内的表达.结果: 人骨肉瘤细胞总RNA经反转录-聚合酶链反应扩增后,获得1.2 kb条带.经酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序证实实验成功克隆BMP-2基因,重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建正确;该重组质粒能在体外培养的小鼠骨髓基质细胞中有效表达BMP-2.结论: 实验成功克隆入骨形成蛋白2基因并构建了此基因的真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨述华	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	562	4404	28.0	40.0
2	傅德皓	华中科技大学同济医学院	57	275	9.0	12.0
3	张字坤	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	1	1	1.0	1.0