兔尿道上皮细胞的体外连续培养

• 作者: 张秉宏 洪宝发 王春杨 王晓雄 符伟军 高江平
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 组织工程 尿道上皮 细胞培养 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（20）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3822-3825
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 5377字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.20.004

摘要

背景:尿道损伤后的瘢痕挛缩或缺损可导致狭窄,寻找理想的修复替代材料已成为研究热点.目的:探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-04/2007-02在解放军总医院泌尿外科完成.材料:健康成年雄性新西兰雄兔6只,体质量3.0～3.5kg;实验用Dispase Ⅱ为美国Gibco公司产品.方法:取雄性新西兰兔尿道黏膜组织,分离上皮采用Dispase Ⅱ工作液,上皮细胞间的分离采用混合消化酶(1.25g/L胰蛋白酶与0.2g/L乙二胺四乙酸等体积混合)消化,以差速贴壁法排除成纤维细胞.使用DMEM与F123:1混合培养液加体积分数为0.1的胎牛血清,对上皮细胞进行原代单纯培养和传代培养;取第2～6代细胞进行上皮细胞的免疫组织化学染色,以正常尿道黏膜组织石蜡切片为阳性对照组,以成纤维细胞铺片为阴性对照组.主要观察指标:①利用倒置相差显微镜动态观察细胞形态、生长、增殖情况.②采用活细胞荧光染色法观察细胞存活状态.③以扫描电镜观察细胞超微结构.④采用免疫组织化学染色行细胞鉴定.结果:①原代培养3-5d细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传9-10代.②第4～6代细胞在免疫荧光染色和超微结构观察中显示良好形态.③免疫组织化学证实角蛋白染色阳性.结论:应用组织工程技术,成功培养尿道上皮种子细胞.结果表明,细胞生长状态良好,增殖较快.经特异性免疫组织化学及形态学鉴定为纯化的尿道上皮细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高江平	解放军总医院泌尿外科	130	819	13.0	22.0
2	洪宝发	解放军总医院泌尿外科	199	1122	16.0	23.0
3	王晓雄	解放军总医院泌尿外科	86	415	10.0	15.0
4	符伟军	解放军总医院泌尿外科	73	333	9.0	14.0
5	王春杨	解放军总医院泌尿外科	10	62	5.0	7.0
6	张秉宏	解放军总医院泌尿外科	1	0	0.0	0.0