胚胎干细胞在可降解聚合三维支架上的生长增殖与分化

• 作者: 刘卫生 刘涛 张世昌 王英杰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 培养 分化 支架 组织工程 生物材料
• 年，卷（期）: 2008,（14）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2648-2651
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4256字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.14.025

摘要

目的:三维可降解生物材料是组织工程的重要载体,观察胚胎干细胞在聚合三维支架上的生长、增殖和分化状态,为胚胎干细胞分化形成任何组织修复替代治疗机体组织器官的损伤和功能衰竭提供实验学依据.方法:实验于2007-05109在解放军第三军医大学西南医院感染病研究所人工肝实验室完成.①材料:鼠胚胎干细胞CCE株为加拿大Stem Cell Technologies公司产品,由聚乳酸和聚乙醇酸聚合而成的非编织型三维支架为美国Synthecon公司产品,细胞外基质MatrigelTM由BD Biosciences公司提供.②实验方法:将鼠胚胎干细胞株接种于被覆明胶的培养瓶内,加入含0.1 mmol/L非必需氨基酸、2 mmol/L L-谷酰胺、0.1 mmol/L二羟基丙硫醇、15%胎牛血清、1000 U/mL白血病抑制因子的IMDM培养液.3 d后采用"悬滴法"使细胞在不含白血病抑制因子的上述IMDM培养液中形成胚胎体,6 d后胰酶消化得到胚胎干细胞,浓度调整为(3～4)×109L-1,与MatrigelTM按1:1混合并接种于剪成5 mm×4 mm×1 mm小片的三维支架内,加入含1%二甲基亚酚、10-7 mol/L地塞米松、5mg/L ITS、15%胎牛血清的IMDM培养液进行诱导分化.③实验评估:激光共聚焦显微镜观察胚胎干细胞在三维支架上的生长与增殖情况;应用荧光染色检测细胞活性;苏木精-伊红染色光镜下观察胚胎干细胞的组织分化情况.结果:①细胞牛长与增殖:接种培养1 d多数胚胎干细胞粘连在一起形成聚集体,状似球形,附着于三维支架的纤维上.7 d时聚集的胚胎干细胞开始沿纤维支架生长,互相粘连,呈片状和网状.细胞数随培养时间延长而不断扩大,至14d细胞交织在一起呈现多层面立体景象,布满整个三维支架.②活细胞观察:接种培养1,7,14 d的胚胎干细胞绝大多数发出绿色荧光,始终保持良好的细胞活性.⑨胚胎干细胞的组织分化:在非特异诱导培养液作用下,胚胎干细胞可向原始血细胞样细胞、血管样结构、软骨样结构和腺样结构分化.结论:胚胎干细胞能够附着于可降解聚合三维支架上生长增殖,并在保持细胞活性的情况下呈现向多细胞、多组织分化的良好态势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘卫生	延安大学附属医院心内科	24	77	6.0	7.0
2	王英杰	解放军大学西南医院感染病研究所	1	2	1.0	1.0
3	张世昌	解放军大学西南医院感染病研究所	1	2	1.0	1.0
4	刘涛	解放军大学西南医院感染病研究所	1	2	1.0	1.0