人类白细胞抗原A表达沉默对大鼠脑内人细胞移植排斥反应的调节

• 作者: 徐云智 段德义 粱彩霞 赵春礼 郑德宇
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 人类白细胞抗原A2 移植排斥
• 年，卷（期）: 2008,（40）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 7801-7807
• 页数: 7页
• 分类号: R457.7
• 字数: 7826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.40.013

摘要

背景:移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用.用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用,但尚未见相关体内研究报道.目的:拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,再将其移植到帕金森大鼠纹状体,观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节.设计、时间及地点:细胞基因工程体内实验,于2005-09/2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成.材料:清洁级12周龄雌性SD大鼠33只,用于建立帕金森动物模型.原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎,由北京京北医院提供.293T为贴壁依赖型成上皮样细胞.慢病毒载体系统由pSicoR,pCMV-VSV-G和psPAX2三质粒组成,为美国Addgene公司产品.携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠.方法:以携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒为模板PCR扩增HLA-A2 cDNA编码区序列,构建人类白细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP-Flag-HLA,转染293T细胞.用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA 4个待选靶点序列,分别起始于编码区的第257,350,833,251位碱基,构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体.用带有Flag标签的人类白细胞抗原A cDNA表达载体转染293T细胞后,再进行不同靶点病毒直接感染.33只帕金森模型大鼠随机分为2组,实验组大鼠纹状体植入人类白细胞抗原A小分子干扰RNA病毒感染的人胚肺成纤维细胞,对照组植入带有小分子干扰RNA对照序列和绿色荧光蛋白病毒感染的人胚肺成纤维细胞.主要观察指标:免疫组织化学染色检测脑内移植物人类白细胞抗原A、CD4和CD8的表达,用抗人细胞核的阳性表达评价移植细胞的存活情况.结果:与对照组比较,实验组移植后4d、2周时人类白细胞抗原A阳性细胞均较少(t=3.301,2.63l,P<0.01,0.05),6周时无明显变化:CD4阳性细胞仪移植后6周明显减少(t=2.269,P<0.05):移植后4 dCD8阳性细胞无明显变化,2周及6周时明显减少(t=2.333,P<0.05);抗人细胞核阳性细胞仅移植后2周明显减少(t=2.952,P<0.05).结论:人类白细胞抗原A表达敲减可以抑制移植排斥反应,但并不能显著延长移植物的存活时间.