大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定

• 作者: 娄远蕾 汪泱 谢安 邓志锋 郭菲 鲁友明
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 骨髓源性 体外培养
• 年，卷（期）: 2008,（16）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3069-3073
• 页数: 5页
• 分类号: R392.2
• 字数: 5554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.16.017

摘要

目的:目前内皮祖细胞主要从骨髓、脐带血和外周血获取,但其分离培养方法尚不成熟,外周血来源因损伤小、易获取而被普遍使用,但得到的内皮祖细胞纯度较低.实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定方法.方法:实验于2006-08/2007-08 在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成.①实验材料:2周龄SD大鼠由南昌大学医学院动科部提供,雌雄不拘,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:应用梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,贴壁筛选法分离内皮祖细胞,置于添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子的M199培养液中扩增培养,对培养2周的细胞采用免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体-2、CD34、CD133, 采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因表达.结果:①培养4 d,光电显微镜下可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长.培养7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观.2周左右可见细胞排列成条索状结构并可呈"微血管样"排列生长.②贴壁细胞免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、FLK-1、CD34、CD133阳性,RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因阳性表达.结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养和体外扩增.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪泱	南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所	71	219	8.0	12.0
2	邓志锋	南昌大学第二附属医院神经外科	47	130	7.0	9.0
3	谢安	南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所	38	102	6.0	8.0
4	娄远蕾	南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所	47	114	7.0	8.0
5	郭菲	南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所	36	127	7.0	9.0
6	鲁友明	南昌大学第二附属医院神经外科	2	6	1.0	2.0