绿色荧光蛋白报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达:用做转染报道基因的可行性鉴定

• 作者: 唐泽立 苏维勇 谢玲 陈小毅 陈燕
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 标记基因 鼻咽肿瘤 CNE1细胞
• 年，卷（期）: 2008,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5486-5489
• 页数: 4页
• 分类号: R739.6
• 字数: 4801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.28.025

摘要

目的:将经过"人类化"改造的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因质粒导入鼻咽癌CNE1细胞系内,观察GFP报道基因转染鼻咽癌细胞系CNE1后的表达情况.方法:实验于2004-07/2007-07在广东医学院病理学实验室完成.将带有GFP报道基因的质粒PAT-GFP及PAT-GFP-LMP1在电容960 μ F,280 V条件下电导转染到鼻咽癌CNE1细胞系中,用选择培养液(嘌呤霉素筛选)继续换液培养直至长出抗性细胞克隆,胰酶消化收集细胞.存488 nm光激发下,用荧光显微镜检测及流式细胞仪观察转染细胞在活的、固定后或裸鼠体内移植后3组细胞的GFP的表达情况并计算转染效率,并用免疫组化法及Western blot法观察插入目的基因LMP1的表达情况.结果:温度在28～32℃的条件下活细胞有GFP基因稳定而持续地表达,但表达较低,表达率为(16.20±1.70)%,且目的基因LMP1的插入明显影响GFP基因的表达,表达率为(3.48±0.28)%,而在固定后或裸小鼠体内移植后均无表达;目的基因LMP1则能稳定而持续地表达.结论:绿色荧光蛋白报道基因GFP在CNE1细胞系中能稳定而持续地表达,且不影响插入目的基因的表达,可用做转染报道基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小毅	广东医学院病理学教研室	92	466	12.0	15.0
2	陈燕	广东医学院病理学教研室	16	90	5.0	9.0
3	唐泽立	广东医学院病理学教研室	17	42	4.0	5.0
4	谢玲	广东医学院病理学教研室	13	74	4.0	8.0
5	苏维勇		1	2	1.0	1.0