摘要:
背景:一些研究发现电刺激可以改变成熟心肌细胞的分布和电生理特性,其是否对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程产生影响目前还不清楚.目的:在诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化过程中,观察低压脉动电刺激对肌细胞增强因子2C基因表达的影响.设计、时间及地点:对比观察电刺激细胞学体外实验,于2005-09/2007-03在四川大学老年病研究室完成.材料:清洁级4周龄雄性SD大鼠5只,由四川大学华西医学中心动物实验室中心提供.诱导剂5-氮胞苷为Sigma产品.使用一次性100 mL培养瓶、镍钛合金会属丝、心脏起搏器和连接导线设计制作电场.方法:密度梯度离心+贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代按1×107 L-1接种到电场内,细胞爬满80%后,加入终浓度为10 μmol/L 5-氮胞苷进行诱导.分别于诱导第1,2,3,4周收集细胞,分为2组:刺激组施加电场刺激,刺激参数选择1.5V/cm电压,2ms方波,频率1 Hz,刺激2周;对照组单纯以5-氮胞苷诱导.主要观察指标:免疫细胞化学法和western blot技术检测肌钙蛋白Ⅰ表达,RT-PCR法分析肌细胞增强因子2C基因的表达.结果:诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周两组均开始出现肌钙蚩白Ⅰ阳性细胞,第3、4周明显增强,诱导各时间点刺激组肌钙蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05).诱导第1周两组均开始表达肌细胞增强冈子2C基因,第2周明显增强,第3周达高峰,持续到第4周,诱导各时间点刺激组肌细胞增强因子2C基因的表达量均显著高于对照组(P<0.05).结论:肌细胞增强因子2C基因可能参与调控心肌细胞的形成过程,而电场刺激通过上调肌细胞增强因子2C基因的表达,进而促进肌钙壁白Ⅰ的表达和心肌细胞的形成.