大鼠脑源性神经营养因子基因重组真核表达载体的构建及其表达

• 作者: 冯忠堂 徐丹 杨智勇 王廷华 董坚 邓兴力
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 基因表达 质粒 转染 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5473-5476
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 3861字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.28.022

摘要

背景:脑源性神经营养因子对多种神经元的发育、存活及轴突再生中起着重要作用,但由于血脑屏障的存在,限制了其应用.目的:构建大鼠腑源性神经营养因子基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达.设计、时间及地点:单一样本实验,于2005-09/2006-09在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:清洁级健康雄性8周龄SD大鼠,体质量250g.方法:①以反转录-聚合酶链反应从大鼠脑组织总RNA扩增脑源性神经营养因子基因编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达载体pcDNA3/BDNF.②将L939细胞分为pcDNA3/BDNF转染组、pcDNA3转染组和未转染组,以FuGene HD转染试剂介导相应质粒转染.主要观察指标:①重组质粒pcDNA3/BDNF的酶切鉴定与序列分析.②免疫细胞化学和western blot鉴定脑源性神经营养因子在L929细胞中的表达.结果:①重组质粒pcDNA3/BDNF经酶切产生783 bp和5.2 kb的片段,DNA测序证实783 bp片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因编码序列完全一致.②基因转染后,免疫细胞化学、western blot结果表明脑源性神经营养因子能在真核细胞中正确表达.结论:成功构建了重组真核表达质粒载体pcDNA3/BDNF,为后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王廷华	昆明医学院神经科学研究所	307	1291	16.0	23.0
2	董坚	昆明医学院第一附属医院生物治疗中心	56	254	8.0	12.0
3	冯忠堂	昆明医学院神经科学研究所	141	600	12.0	17.0
4	邓兴力	昆明医学院第一附属医院神经外科	40	130	6.0	9.0
5	徐丹	昆明医学院神经科学研究所	13	41	4.0	5.0
6	杨智勇	昆明医学院第一附属医院神经外科	64	176	7.0	9.0