不同体外诱导培养条件下新生鼠基底前脑神经干细胞增殖和分化为神经元的能力

• 作者: 冷水龙 张贵平 李佳楣 李晓滨 罗媚 谷海刚 龙大宏
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 神经元 基底前脑 表皮生长因子 碱性成纤维生长因子
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1445-1448
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.08.023

摘要

目的:研究神经干细胞的增殖、迁移和分化可为揭示神经系统的发生、发育过程提供可靠依据.观察表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外刺激新生鼠基底前脑神经干细胞的增殖情况,及其各自诱导神经干细胞分化成神经元的能力.方法:实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成.①动物:清洁级新生24 h内的SD大鼠30只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:新生鼠在无菌条件下取脑,分离出基底前脑,胰蛋白酶消化,离心过滤制备单细胞悬液,接种于含B27的DMEM/F12培养基培养瓶中,每瓶40～60万个细胞,加入终浓度均为10μg/L的表皮生长因子和碱性成纤维生长因子刺激生长,在体外进行神经干细胞的克隆培养,传代培养过程中加入终浓度为6 mg/L BrdU用于标记神经球,设立3组,各自加入体积分数为0.1的小牛血清、终浓度均为10μg/L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子,对培养得到的神经干细胞进行诱导分化.③实验评估:免疫荧光染色检测神经干细胞巢蛋白抗原的表达,并用BrdU标记和免疫荧光证实其增殖能力.免疫荧光染色检测不同诱导条件下神经干细胞向神经元分化的能力. 结果:①细胞形态观察:从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞,原代培养呈透亮的圆球形,2～3 d后细胞数目明显减少,部分细胞开始分裂.1周左右培养瓶中出现许多由数十到数百个细胞组成的悬浮生长的细胞球,球中的细胞形态规则,边界清楚,折光性较强,胞浆颜色较深,核/浆比较大.该细胞具有连续增殖能力,可以传代培养.②巢蛋白抗原的表达:传代神经球中的细胞均呈巢蛋白抗原阳性.③BrdU标记检测:克隆球中的细胞均为BrdU阳性,表明克隆球是由不断分裂增殖的细胞组成.④诱导分化结果:在体积分数为0.1小牛血清、终浓度均为10μg/L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子诱导条件下,神经干细胞分化为神经元的比例分别为20%,22%,40%.结论:①表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外能够刺激新生鼠基底前脑神经干细胞连续增殖,且具有胚胎源性.②以血清作为对照,碱性成纤维生长因子诱导神经干细胞向神经元分化的能力强于表皮生长因子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谷海刚	广州医学院组织胚胎学教研室	14	94	6.0	9.0
2	龙大宏	广州医学院解剖学教研室	68	369	10.0	15.0
3	李晓滨	广州医学院组织胚胎学教研室	13	83	6.0	8.0
4	张贵平	广州医学院药理学教研室	27	269	7.0	15.0
5	李佳楣	广州医学院解剖学教研室	9	55	4.0	7.0
6	冷水龙	广州医学院解剖学教研室	29	165	7.0	11.0
7	罗媚	广州医学院解剖学教研室	5	35	3.0	5.0