鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立

• 作者: 曾耀英 李孝建 李延仓 杨小红 沈雁 谭见容
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮干细胞 细胞培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（25）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4851-4854
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4857字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.25.017

摘要

背景:采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤,存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足.而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新,但在体外普通培养条件下易发生终末分化.目的:为抉得稳定生长的鼠表皮干细胞,拟建立或完善能够调控其增殖分化的体外培养体系.设计、时间及地点:细胞观察,于2007-05/11在广州市创伤外科研究所完成.材料:清洁级1～3 d龄Wistar大鼠20只用于制备表皮于细胞.方法:采用两步酶消化法获得单个表皮细胞悬液,Ⅳ型胶原快速贴壁法分选贴壁细胞,加入含胎牛血清、0.05 mmol/L CaCl2以及表皮细胞生长因子、腺苷、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素等复合的DMEM培养基进行培养,原代分离细胞时胎牛血清体积分数为0.2以维持细胞活性,第2次换液时改为0.1.主要观察指标:光镜下观察细胞生长情况,免疫组化法检测目的细胞角蛋白19和P63整合素的表达,流式细胞仪检测β1整合素和CD71的表达,通过细胞周期及生长曲线观察其增殖能力.结果:①Ⅳ型胶原筛选的细胞在复合DMEM培养基中生长良好,细胞活性>98%,培养6 d后形成含100-200个细胞的大克隆,呈鹅卵石样铺满瓶底.②角蛋白19和P63均呈阳性表达,β1整合素表达率为98.57%,CD71表达率为9.05%.③94.99%细胞处于G0/G1期,细胞呈指数增长.结论:两步酶消化+Ⅳ型胶原快速黏附法可成功分选稳定生长的鼠表皮干细胞.含霍乱毒素、腺苷、胰岛素等因子的复合DMEM培养基可维持表皮干细胞的增殖能力,其中合适的血清浓度及Ca2+浓度至关重要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾耀英	暨南大学生命科学院组织植与免疫中心	300	2350	22.0	32.0
2	杨小红	暨南大学第四附属医院广州市红字会医院烧伤科	27	219	10.0	13.0
3	李延仓	暨南大学第四附属医院广州市红字会医院烧伤科	3	10	2.0	3.0
4	李孝建	暨南大学第四附属医院广州市红字会医院烧伤科	39	137	7.0	9.0
5	沈雁	暨南大学第四附属医院广州市红字会医院烧伤科	19	137	8.0	11.0
6	谭见容	暨南大学第四附属医院广州市红字会医院烧伤科	4	13	3.0	3.0