体外培养羊骨髓间充质干细胞增殖及表型特征

• 作者: 丁光宁 寇炳祯 左炳光 曹富余 曹希武 杨利 王秀芬 苗军 许效坤 谢晨学
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 羊 骨髓间充质干细胞 体外培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 骨髓间充质干细胞培养与分化
• 页码范围: 465-468
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.03.004

摘要

目的:关于鼠、兔等小动物骨髓间充质干细胞的研究较多,而对大动物骨髓间充质干细胞研究较少.实验拟了解体外培养的羊骨髓间充质干细胞的生物学特性,以便于组织工程研究使用.方法:实验于2006-01/2007-01在天津市天津医院完成.①实验材料:天津医院动物实验中心提供的健康中国山羊,10月龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:抽取羊骨髓5 mL,梯度离心制备单个有核细胞,并接种于无菌的50 mL塑料培养瓶中,培养体系为含体积分数为0.10 FBS的DMEM.利用多孔培养板对培养的骨髓间充质干细胞进行细胞生长曲线测定.选用抗CD44单克隆抗体,应用免疫组化学方法对培养的骨髓间充质干细胞进行表型鉴定.结果:①培养的骨髓间充质干细胞黏附贴壁、呈纺锤状,并有多个突起.②一般细胞接种密度下的骨髓间充质干细胞,三代细胞生长周期基本一致,均为接种培养后前二三天,生长较缓慢,为生长迟滞期.3 d后细胞生长加速,有一快速增长过程,达到对数生长期,于七八天时,细胞数达最高值,为生长平台期,其后生长速度减缓.③免疫细胞化学染色后显示所培养细胞的细胞膜抗原CD44有阳性表达.结论:培养的骨髓间充质干细胞具有较强的遗传稳定性和增殖能力,培养的细胞不是骨髓造血干/祖细胞,而是一群均一的间充质干细胞,具有独特的增殖和表型特征.