小鼠LRP16基因打靶载体的构建和同源重组型胚胎干细胞筛选

• 作者: Masatoshi Nomura 伍志强 司艺玲 孟元光 母义明 赵亚力 韩为东
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: LRP16 基因打靶 胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2391-2395
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 2613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.12.005

摘要

背景:LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.目的:构建针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell)并筛选同源重组克隆.设计:通过SA-PIES-βgeo插入小鼠LRP16基因组DNA构建插入失活型打靶载体.单位:日本九州大学第三内科生物调控研究室与解放军总医院分子生物室.材料:本实验所用主要材料由日本九州大学生物调控研究室提供.实验所用鼠基因组文库(mouse genomic library in pBeloBAC11 Vector)购自invitrogen公司,TopF10感化态细菌购自北京天为时代公司,pCDNA3.1(+)由本室保存.鼠胚胎干细胞株由日本九州大学提供.方法:实验主要工作于2004-11/2005-05在日本九州大学生物调控研究室与解放军总医院分子生物室完成.PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建捅入失活型打靶载体并转染胚胎干细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组胚胎干细胞克隆.主要观察指标:具有同源重组的胚胎干细胞克隆.结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ+载体.SA.IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染胚胎干细胞,Southern blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的胚胎干细胞克隆.结论:成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组犁胚胎干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亚力	解放军总医院分子生物室	93	443	10.0	17.0
2	孟元光	解放军总医院妇产科	133	638	12.0	19.0
3	母义明	解放军总医院内分泌科	329	2074	22.0	31.0
4	韩为东	解放军总医院分子生物室	113	744	13.0	23.0
5	伍志强	解放军总医院分子生物室	47	114	6.0	9.0
6	司艺玲	解放军总医院分子生物室	37	134	7.0	9.0