体外培养和冷冻保存对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响

• 作者: 于炜婷 吕国军 张英 王为 郭昕 雄鹰 马小军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞移植 体外培养时间 冷冻保存 重组内皮抑素细胞 内皮抑素
• 年，卷（期）: 2008,（45）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8963-8968
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 1491字
• 语种: 中文

摘要

背景:微囊化基因工程细胞移植治疗需要制各大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊,体外培养和冷冻保存是生物微胶囊制备过程中两个重要的环节.目的:考察体外培养时间和冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长和内皮抑素表达的影响及体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存的影响.设计、时间及地点:于2006-04110在大连化学物理研究所生物医用材料实验室完成实验.材料:海藻酸钠与聚赖氨酸为美国Sigma公司产品.方法:将微囊化的重组内皮抑素细胞分装于24孔板中;每孔分装0.1 mL微胶囊,加入DMEM/F12培养液2 mL.微囊化细胞在37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养.每2 d采用MTT法测微囊内的活细胞密度,并收集培养上清测内皮抑素表达量.主要观察指标:微囊化细胞生长情况和内皮抑素表达量.结果:体外培养时间对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性具有较大的影响,体外不培养和培养4 d的微囊化细胞在小鼠腹腔内生长良好、内皮抑素表达量高,并且微囊稳定性好,而体外培养8 d的微囊化细胞在移植后的第26天破裂.体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存也具有较大的影响,体外培养4和8 d的微囊化细胞在液氮中冷冻保存40d,复苏后细胞生长良好、内皮抑素表达量高,而冻存前未经过体外培养的微囊化细胞,复苏后细胞几乎全部死亡.结论:生物微股囊在体外比较适宜的培养时间为4 d.并且冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响.