重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中的表达

• 作者: 乐超银 何光源 刘敏 王健 谢伟
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人粒细胞集落刺激因子 大肠杆菌 原核表达 载体构建
• 年，卷（期）: 2008,（46）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9181-9183
• 页数: 3页
• 分类号: R392
• 字数: 896字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.46.015

摘要

背景:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(human granuiococyte-maerophage colony stimulating factor,hGM-CSF)足刺激造血前体细胞分化及增殖的细胞因子,同时在机体免疫调节过程中具有重要作用.大肠杆菌表达系统所具有的低成本、高产量等优点则是其他体系无法比拟的,因此仍是目前最常用的外源基因表达系统.目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中的表达.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-02/06在三峡大学生物技术研究中心实验室完成.材料:质粒pBR322hGM-CSF购自美国ATCC菌种保藏中心.hGM-CSF抗体购自Sigma公司,IPTG、X-gal和载体pMGT-18,购自上海生物工程技术公司.方法:根据hGM-CSF基因序列设计出引物,以克隆载体质粒pBR322-hGM-CSF为模板,得到hGM-CSF基因并重组入原核表达载体pGEX-4T-1中,将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH5 α,用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定并用Western bloting检测.主要观察指标:hGM-CSF在大肠杆菌中的表达.结果:SDS-PAGE显示,得到相对分子量为40 500的目的蛋白,表达量町达菌体总蛋白的17.9%.Western bloting检测表明,抗hGM-CSF单抗可与相对分子量为40 500大小的电泳条带发生特异性反应.结论:实验构建了原核表达载体pGEX-hGM-CSF,并在大肠杆菌中诱导表达,得到hGM-CSF融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘敏	三峡大学生物技术研究中心	74	502	12.0	19.0
3	乐超银	三峡大学生物技术研究中心	75	713	15.0	21.0
5	何光源	华中科技大学生命科学与技术学院	59	599	14.0	22.0
8	王健	三峡大学生物技术研究中心	13	113	6.0	10.0
9	谢伟	三峡大学生物技术研究中心	7	40	3.0	6.0