肿瘤坏死因子α和白细胞介素4对脐血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞体外培养体系的影响

• 作者: 孙志达 季晓辉 李明顺 杨晓帆 王慧娟 邢美芬 顾镭
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脐血 CD34+造血干细胞 树突状细胞 体外培养
• 年，卷（期）: 2008,（34）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6785-6789
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.34.029

摘要

背景:造血干细胞是构筑免疫系统的最早的细胞,能分化为多种细胞,其中具有包括免疫应答调控树突状细胞.树突状细胞的诱导培养因前体细胞来源不同,所采用的细胞因子,及最佳的细胞因子配伍、应用顺序、实验室培养条件亦不相同,树突状细胞的发育、各种表犁的表达及成熟度也不尽相同.目的:观察肿瘤坏死因子α和白细胞介素4对脐血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞诱导培养体系的影响,探寻该培养体系优化方法.设计、时间及地点:观察性实验,于2005-03/11在南京医科大学微生物与免疫学实验室完成.材料:健康新生儿脐血为南京市八一医院产妇同意捐赠.CD34单克隆抗体一磁珠分离系统为德国Miltenyi Biotec公司产品:重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素4和重组人肿瘤坏死因子α为美国PeproTech公司产品.方法:淋巴细胞分离液分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+造血干细胞,并用流式细胞术鉴定CD34+造血干细胞纯度:比较GT(GM-CSF+肿瘤坏死因子α)方案和GTI(GM-CSF+肿瘤坏死因子α+自细胞介素4)方案及GTI方案中肿瘤坏死因子α和白细胞介素4不同时段加入对诱导培养产生的树突状细胞成熟的影响;通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测树突状细胞激发异体T细胞增殖能力.结果:免疫磁珠阳性分选CD34+造血干细胞纯度町达90%以上.将CD34+造血干细胞按GT方案和GTI方案进行培养.均可诱导产生树突状细胞,CD34的阳性表达率逐渐下降,HLA-DR的表达下降(P＜0.05),树突状细胞的相关分化抗原CD80,CD86,CD83和CDla的表达均相应增加,培养13～15 d的细胞各表型表达较7～9 d,10～12 d充分.但经GT方案诱导的树突状细胞CD14表达较高,cD80,CDB6,CD83,CD1a表达不如经GTI方案诱导的高;而GTI方案中,以肿瘤坏死因子aoh、白细胞介素448 h加入诱导培养的树突状细胞各表型表达相对较佳,其细胞表达CD80,CD86均较其他组高,尤以CD86表达为著,并具有激发异体T细胞增殖能力.结论:CD34+造血干细胞经过合适的培养体系能够诱导分化为功能性树突状细胞,以GM-CSF与肿瘤坏死因子α O h加入、白细胞介素4 48 h加入的GM-CSF+肿瘤坏死因子α+白细胞介素4方案更为可取.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾镭	南京医科大学附属第一医院风湿科	24	114	7.0	9.0
2	季晓辉	南京医科大学微生物与免疫学系	154	1253	19.0	26.0
3	邢美芬	南京医科大学附属第一医院风湿科	23	60	4.0	6.0
4	杨晓帆	南京医科大学微生物与免疫学系	20	105	6.0	9.0
5	王慧娟	南京医科大学微生物与免疫学系	41	229	9.0	12.0
6	孙志达	南京医科大学微生物与免疫学系	19	119	8.0	10.0
7	李明顺	南京医科大学微生物与免疫学系	1	1	1.0	1.0