含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2表达载体的构建

• 作者: 刘春蓉 夏群 石可松 苗军 黄鸿超
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类 基因表达 绿色荧光蛋白质类 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（24）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 4615-4618
• 页数: 4页
• 分类号: R392.471
• 字数: 4414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.24.003

摘要

目的:骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一.实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础.方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成.①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司):pTA2R-T Easy(鼎国生物技术有限公司).②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的蘑组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.结果:①聚合酶链反应获得长度约1 216 bp的目的片段,与预期片段相符.②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配.结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏群	天津市天津医院脊柱外科	71	921	15.0	27.0
2	苗军	天津市天津医院脊柱外科	57	395	11.0	17.0
3	刘春蓉	天津武警医学院病理学教研室	5	7	2.0	2.0
4	黄鸿超	天津市天津医院脊柱外科	2	0	0.0	0.0
5	石可松	天津市天津医院脊柱外科	2	0	0.0	0.0