脑源性神经营养因子对胎鼠神经干细胞向神经元方向分化的诱导

• 作者: 张勇 朱春然 陶轶
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 脑源性神经营养因子 神经元 分化 MASH-1
• 年，卷（期）: 2008,（51）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10073-10076
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.51.023

摘要

背景:神经元是中枢神经系统起主导功能的细胞,培养干细胞的最终目的是获得相应表型的神经元,从而促进中枢神经系统损伤的修复.但以往相关文献显示神经干细胞分化为神绛元的比例不到30%.目的:以脑源性神经营养因子作为诱导分化剂.观察其对胎鼠源性神经干细胞向神经元方向分化的作用.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于 2006-0612007-08在南京医科大学第一附属医院中心实验室完成.材料:清洁级孕14～17 d的SD大鼠10只,诱导分化剂脑源性神经营养因子为Peprotech产品,胎牛血清为杭州四季青产品.方法:孕鼠处死后取出胚胎,剪碎后机械法体外分离培养神经干细胞,锥虫蓝染色计数,调整细胞密度为2×106,添加B27及碱性成纤维细胞生长因子,置于37℃、体积分数为0.05的CO2恒温箱中原代培养,待细胞克隆球明显增大、中央变暗时传代扩增.将培养所得的于细胞克隆球分为2组,诱导组添加体积分数为0.01的胎牛血清+20μg/L脑源性神经营养因子共培养,血清对照组仅添加体积分数为0.01的胎牛血清.主要观察指标:在倒置显微镜下观察细胞生长、贴壁和分化情况.诱导分化5 d后,行神经元免疫组化鉴定,流式细胞仪检测神经元阳性细胞率.取原代培养未分化的神经干细胞及诱导分化3 d的两组细胞,RT-PCR检测内源性bHLH基因MASH-1的表达.结果:原代培养可获得数十至数百个神经干细胞聚集在一起的神经克降球,形态规则,立体感强:悬浮生长的克隆球经诱导分化后,逐渐失去其球状的立体外观,邻近克隆球发出的突起可相互连接,3 d后即有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞从克隆周围出现,培养的神经干细胞呈巢蛋白阳性表达,诱导分化后呈微管相关蛋白2阳性表达.与血清对照组比较,诱导组神经元阳性细胞率显著升高(x2=16.0.P<0.05).与未分化的神经干细胞比较,诱导组、血清对照组细胞MASH-1的表达均明显升高,且前者升高幅度明显强于后者(F=21.7,P<0.05).结论:脑源性神经营养因子能促进神经干细胞向神经元方向分化,可能与内源性bHLH基因MASH-1的表达升高有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶轶	江苏省肿瘤医院神经外科	8	29	4.0	5.0
2	张勇	江苏省中西医结合医院神经外科	13	56	3.0	7.0
3	朱春然	江苏省中西医结合医院神经外科	9	36	4.0	6.0