FUT3基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 宋玉和 岳庆祝 张玉玲 栾英姿 汪运山 苏占涛 辛永红
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: miRNA RNA干扰 FUT3基因 靶向治疗 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（37）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7306-7309
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.37.020

摘要

背景:研究发现,Lewis血型抗原与多种恶性肿瘤关系密切,岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase ,FUTs)是参与合成Lewis抗原的关键酶,FUT3是其中之一.目的:设计并构建靶向FUT3基因的miRNA干扰质粒,为探索肿瘤基因治疗新途径奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-05/10在济南市中心医院医学实验诊断中心完成.材料:BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector Kits (含荧光基因 GFP) 、T4 DNA连接酶购自invitrogen公司;大肠杆菌菌株One Shot TOP10购自invitrogen公司.方法:根据GenBank中FUT3的序列,应用www.invitrogen.com网站的设计软件设计、合成针对FUT3 miRNA的相应Oligo DNA,退火后与BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector相连接,转化感受态 E.coli TOP10 .主要观察指标:①重组质粒DNA序列分析.②质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳检测.③紫外分光光度计检测.④聚合酶链反应鉴定.结果:经测序鉴定和聚合酶链反应鉴定证实成功构建针对人FUT3基因的miRNA干扰质粒 pcDNATM6.2-GW/EmGFP- FUT3-miR;质粒DNA的琼脂凝胶电泳检测和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可以用于后续试验.结论:FUT3 靶向miRNA表达载体构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪运山	济南市中心医院医学实验诊断中心	65	281	10.0	13.0
2	辛永红	泰山医学院临床学院济南市第四人民医院输血科	2	2	1.0	1.0
3	岳庆祝	泰山医学院临床学院济南市第四人民医院输血科	1	0	0.0	0.0