兔骨髓基质细胞的体外培养及鉴定

• 作者: 卢小虎 徐忠世 李冉 林博文 肖德明
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 细胞培养 冻存复苏
• 年，卷（期）: 2008,（51）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10197-10200
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1116字
• 语种: 中文

摘要

背景:骨髓基质细胞的分离纯化、细胞培养、细胞标记、诱导因子、基因转染对细胞生物学影响、细胞载体构建及细胞复合物回植时间的选择等尚处于实验研究阶段.目的:摸索一种较为简便且可有效获得骨髓基质细胞的体外培养方法.设计、时间及地点:细胞学体外实验.于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成.材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,由中国科学院遗传发育研究所实验动物中心提供.方法:无菌条件下抽取兔骨髓1 mL,D-Hanks液稀释后,离心弃上清,DMEM培养基重悬,制备单细胞悬液,叠加在密度为1.077的等体积淋巴细胞分离液的液面上,离心后取界面云雾状的单个核细胞层,用含有20%胎牛血清的DMEM培养基重悬.以1×10/cm2接种后贴壁法纯化细胞,待70%～80%长满单层后消化传代.主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,锥虫蓝染色计数活细胞,苏木精.伊红染色对细胞进行鉴定,MTT法检测细胞活性,观察传代培养的细胞冻存后复苏情况.结果:接种24h后细胞开始贴壁,呈短梭形或三角形,且有长短不等的细胞突起;3 d后贴壁细胞开始分裂增殖,部分区域形成细胞团簇:1周后大部分细胞呈成纤维状散落在培养瓶底生长:传代后细胞均匀分布,形态呈细长梭形,并沿一定方向排列,1 mL骨髓基质细胞悬液传3代后的贴擘细胞数可达5×106～1 × 107数量级.骨髓基质细胞成活率约为90%,经鉴定为单核细胞,接种后1～6d细胞持续旺盛生长,至第8天细胞活性最高,随后生长活性下降.复苏冻存56 d的细胞,其生长良好,增长迅速.结论:以淋巴细胞分离液梯度离心后可获得纯度较高的骨髓基质单核细胞,经体外扩增培养能够得到足够数量的种子细胞,冻存复苏后细胞活性无变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖德明	深圳市第二人民医院骨科	37	176	8.0	10.0
2	林博文	深圳市人民医院骨科	38	357	10.0	18.0
3	卢小虎	深圳市人民医院骨科	19	106	6.0	10.0
4	徐忠世	深圳市人民医院骨科	25	132	7.0	10.0
5	李冉	深圳市人民医院骨科	6	22	3.0	4.0