ODDD调节HSV-TK/GCV对乏氧环境宫颈癌Hela细胞特异杀伤作用的研究

• 作者: 严丽 刘磊 方艳秋 许淑芬 谭岩
• 来源期刊: 中国妇幼保健
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧 Hela细胞 氧依赖降解结构域 单纯疱疹病毒胸苷激酶 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 实验与基础研究
• 页码范围: 1278-1281
• 页数: 4页
• 分类号: R733
• 字数: 3306字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4411.2008.09.056

摘要

目的:构建一种由氧依赖降解结构域(oxygen dependent degradation domain,ODDD)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因表达的真核表达载体,观察ODDD能否使HSV-TK/GCV(gancyclovir)系统对乏氧环境中的宫颈癌Hela细胞有特异杀伤作用.方法:RT-PCR从Hda细胞中钓取ODDD片段,将PCR产物克隆入荧光报告载体pEGFP-C1,获得质粒pEGFP-ODDD;PCR扩增HSV-TK基因,将其克隆到pEGFP-ODDD和pEGFP-C1的下游,获得重组质粒pEGFP-ODDD-TK及pEGFP-TK.荧光报告载体pEGFP-ODDD转染Hela细胞,24 h后应用流式细胞术检测在乏氧(O2浓度为1%)和常氧(O2浓度为21%)环境下细胞中EGFP表达强度.将具有相同转染效率的pEGFP-ODDD-TK和pEGFP-TK的Hela细胞分别予以GCV处理,5天后用MTT法检测GCV对培养细胞的杀伤效果.结果:ODDD序列和HSV-TK序列与预期一致;含有ODDD片段荧光报告载体的Hela细胞在正常氧浓度下EGFP的表达量为11.96%,低于缺氧条件下39.92%;在乏氧环境下,转染pEGFP-ODDD-TK的Hela细胞对GCV的敏感性高于正常氧含量组(P＜0.0),而转染pEGFP-TK的Hela细胞在常氧和乏氧环境下对GCV的敏感性差异无统计学意义(P＞0.05).结论:成功地构建了含有ODDD序列调控的HSV-TK真核表达载体,ODDD能特异发挥HSV-TK/GCV系统对乏氧环境Hela细胞的杀伤作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘磊	吉林大学第一医院中心实验室	211	1231	18.0	25.0
2	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
3	方艳秋	吉林大学第一医院中心实验室	76	250	7.0	11.0
4	许淑芬	吉林大学第一医院中心实验室	37	200	6.0	13.0
5	严丽	长春市中心血站	1	1	1.0	1.0