新生大鼠前软骨干细胞株的体外培养分选、鉴定及永生化研究

• 作者: 张树威 胡伟华 郭风劲 陈安民
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: SV40T 干细胞 软骨 细胞培养 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（43）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8588-8592
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.43.032

摘要

背景:前软骨干细胞虽然具有较强的自我增殖能力和多向分化潜能,但生物学性状不稳定,易分化.导入外源性基因能使其永生化,且不改变细胞的表型和性状.目的:建立永生化大鼠前软骨干细胞株,为以后精确调控前软骨干细胞的增殖与分化打下基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-10/2006-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成.材料:出生＜24 h的新生SD大白鼠,雌雄不限,用于取前软骨干细胞.方法:用LipofectamineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代前软骨干细胞进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养.主要观察指标:①前软骨干细胞的生物学性状.②质粒鉴定.③用免疫细胞化学方法和反转录聚合酶链反应鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达.④反转录聚合酶链反应结果.⑤细胞生长曲线.结果:①免疫磁珠分离获得细胞阳性克隆,用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性.②双酶切质粒,电泳证实pCMV为3 kb,SV40T基因为2.3 kb.③嘌呤霉素分离获得转化后细胞阳性克隆,用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性.④提取RNA后用反转录-聚合酶链反应法成功扩增出588 bp的片段.转染细胞经扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞.⑤贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为(22.98±2.77) h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响.结论:在体外培养条件下,可以从新生大鼠干骺端中分离、培养出前软骨干细胞.pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈安民	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	315	2057	20.0	29.0
2	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	215	1233	17.0	23.0
3	胡伟华	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	18	59	4.0	6.0
4	张树威	华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科	8	32	4.0	4.0