Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立

• 作者: 姚丽娟 孔建新 常珍 濮跃晨 罗以勤 赵亮 马筱玲
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤抑素 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（34）
• 所属期刊栏目: 研究生专栏
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: R786
• 字数: 3851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2008.34.010

摘要

目的 构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1).方法 利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipofectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达.结果 重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上.结论 成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亮		20	62	5.0	6.0
2	罗以勤		27	130	7.0	10.0
3	孔建新		14	76	6.0	8.0
4	马筱玲		60	443	11.0	18.0
5	濮跃晨		10	36	3.0	6.0
6	姚丽娟		18	81	6.0	8.0
7	常珍		3	3	1.0	1.0