红星梭子蟹变应原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫学鉴定

• 作者: 刘志刚 吴凯威
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 红星梭子蟹 变应原 原肌球蛋白 基因克隆 表达 MALDI-TOF-MS质谱
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 页码范围: 296-303
• 页数: 8页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 3766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.0000.2009.20296

摘要

克隆、表达红星梭子蟹蟹肉中变应原原肌球蛋白(Tropomyosin),并对其免疫学特性进行鉴定.RT-PCR克隆红星梭子蟹(Ponunus sanguinolentus)蟹肉中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增蟹Tropomyosin的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia.coli BL21(DE3),诱导表达后,N不i2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot检测其免疫学活性,胰酶消化后进行MALDI-TOF-MS质谱分析鉴定.克隆所得蟹Tropomyosin基因包括一个编码285个氨基酸的开放阅读框.序列分析结果显示所克隆得到的基因与已知虾、螨、蟑螂等的Tropomyosin变应原基因有较高的同源性(＞80%).根据变应原的命名规则,将其命名为Pors 1,并提交GenBank数据库,登录号为EF143836.重组蟹Tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后进行Western-blot检测,结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性,MALDI-TOF-MS质谱分析进一步证实了该重组变应原的正确性.本研究成功克隆和表达了红星梭子蟹变应原Tropomyosin,为蟹过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学生命科学学院	324	1724	17.0	23.0
2	吴凯威	深圳大学生命科学学院	3	37	3.0	3.0