家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

• 作者: 刘立丽 吕正兵 吴祥甫 姚斐 张耀洲 沈红丹 王丹 盛清 聂作明 舒建洪 舒特俊 许红 陈健 陈剑清
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 脂围蛋白 蛋白纯化 基因表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 737-745
• 页数: 9页
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 4459字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2009.04.006

摘要

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关.从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD.经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因.将该基因插入到载体pET-28a( + )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a( + )-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在.用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上.通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是: BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带.以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布.