栝楼ISSR-PCR体系的正交优化

• 作者: 斯金平 朱玉球 李慧慧 高燕会
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 农学
• 关键词: 栝楼 简单序列重复区间(ISSR) 正交设计 优化体系
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: S567.23
• 字数: 3432字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立栝楼最佳ISSR-PCR正交优化体系,为开展栝楼ISSR分子标记奠定技术基础.方法:采用正交试验设计对影响栝楼ISSR-PCR扩增的重要参数(DNA模板、MgCl_2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶)进行优化试验,同时进行不同温度梯度试验和ISSR体系筛选.结果:最佳的栝楼ISSR-PCR的反应体系(20μl)为:30ng模板DNA,2.0mmol/L MgCl_2,0.3mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物,0.5U Taq DNA聚合酶;退火温度为52%～55℃;扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,52℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环;72℃延伸7min;4℃保存.结论:建立了栝楼的最佳ISSR反应体系,为栝楼种质鉴定提供了更客观可靠的方法.