小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体的构建及表达

• 作者: 封德顺 林爱玲 王洪刚 田纪春 马信
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦 TaCKXI基因 原核表达 His融合蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3465字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKXI原核表达载体并进行表达,以期得到大量的His标签融合蛋白.方法:根据GenBank中的TaCKXI序列以及pET-24a载体中的多克隆位点设计引物,以含有TaCKXl编码基因的批pMD-QRCKXI重组质粒为模板,经PCR扩增得到TaCKXI基因的DNA片段.将所得的片段与pET-24a载体连接,转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆,其测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pET-TaCKXI已构建成功.提取per-TaCKXI质粒转化到BL21(DE3)pLysS表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件.结果:在大肠杆菌中获得TaCKXI基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为58.91kD;IPTG终浓度为0.5、1.0、1.5.2.0mmol/L时,诱导融合蛋白产量相差不大.选用0.5mmol/L诱导15h获得大量的融合蛋白.经用原核表达蛋白纯化试剂盒纯化,得到了单一的融合蛋白.结论:小麦TaCKXI基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后TaCKXI蛋白多克隆抗体的制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪刚	山东农业大学农学院	116	1903	25.0	36.0
2	田纪春	山东农业大学农学院	124	2638	26.0	47.0
3	封德顺	山东农业大学农学院	13	62	5.0	7.0
4	林爱玲	山东农业大学信息科学与工程学院	5	18	2.0	4.0
5	马信	山东农业大学农学院	2	11	1.0	2.0