γ-分泌酶在神经干细胞分化过程中的调节作用

• 作者: 张悦红 杨丽红 王江涛 解军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: γ-分泌酶 早老素1 Notch 神经干细胞 分化
• 年，卷（期）: 2009,（14）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 2727-2732
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.14.024

摘要

背景:Notch信号通路在神经干细胞分化过程中起着关键作用,而γ-分泌酶是Notch信号通路调节的核心环节.目的:对神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性、酶解产物Notch胞内段的生成量以及活性中心早老素1的表达进行检测.设计、时间及地点:细胞学基因水平榆测,于2008-10/200g-01在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室完成.材料:清洁级胚龄15 d的BALB/c胎鼠由中国药品生物制品检定所提供,质粒Notch1 △E-GVP和MHl00山瑞典斯德哥尔摩诺贝尔医学学会的Urban Lendahl教授惠赠,荧光素酶质粒pRL-CMV为Promega公司产品.方法:体外分离培养胎鼠脑皮质神经干细胞,传至第5代后,按5×104/cm2密度接种到24孔板,每孔转染200 ngMH100,100 ng Notch1 △E-GVP和2ng pRL-CMV质粒.主要观察指标:利用GaH-VP16/UAS系统和双荧光素酶报告基因系统测定神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性;通过Western blot技术榆测酶解产物Notch胞内段的生成量;采用实时荧光定量PCR法测定γ-分泌酶活性中心早老素1 mRNA的表达.结果:在γ-分泌酶抑制剂DAPT作用下,γ-分泌酶活性呈剂量依赖性降低,与对照组相比,0.1μmol/L DAPT即可对γ-分泌酶活性产生明显的抑制作用(P＜0.05),至50μmol/L DAPT时γ-分泌酶活性降低近100倍(P＜0.001).Notch胞内段的生成量也同步减少,与DAPT抑制γ-分泌酶活性呈剂量依赖性的结果一致.与对照组相比,早老素1 mRNA表达水平经0.1 μmol/L DAPT干预后开始升高,并随着DAPT浓度增加而逐渐升高.结论:神经干细胞分化过程中,γ-分泌酶抑制剂干预后γ-分泌酶活性与酶解产物生成量呈剂量依赖性降低,活性中心基因表达则呈反馈性的同步增高.