不同载体构建人神经生长因子的比较

• 作者: 戚菁 李琳 李素芹 李越希 潘明洁
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 人神经生长因子 基因克隆 真核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 37-42
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 语种: 中文

摘要

探讨人神经生长因子(hNGF)在不同信号肽同一载体与不同载体表达量的差异.应用分子生物学技术从pcDNA3.1-β-NGF中获得β-NGF基因,并对它进行替换载体和优化信号肽,构建两个新重组质粒pMD902-β-NGF和pcDNA3.1-His-β-NGF,通过酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒构建成功;利用脂质体转染技术,将重组质粒pMD902-β-NGF、pcDNA3.1-β-NGF和pcDNA3.1-His-β-NGF转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中,通过ELISA技术,检测到CHO细胞上清中有NGF的表达,优化信号肽的pcDNA3.1-His-β-NGF表达量高于没有优化信号肽的pcDNA3.1-β-NGF.重组质粒pMD902-β-NGF表达量最低.鸡胚背根神经节法检测,表达产物都能促进神经节的生长.通过实验分析发现,3个重组质粒表达水平有较大差异.